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                ELISA試劑盒常見問題處理

                更新時(shí)間:2019-05-30      點(diǎn)擊次數(shù):2833

                出現(xiàn)問題

                出現(xiàn)問題的原因

                解決辦法

                曲線
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 

                 
                 
                 
                 
                OD值不正常
                 
                 
                 
                 
                 
                 
                 

                試劑盒未回溫

                試劑盒回溫到25℃

                 

                 

                溫度控制不好

                控制正確溫度

                 

                 

                孵育時(shí)間不準(zhǔn)確

                控制孵育時(shí)間

                 

                 

                洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增加

                洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干

                 

                 

                陽光直射,對(duì)著風(fēng)直接吹

                避風(fēng)避光

                 

                 

                酶標(biāo)儀的波長錯(cuò)誤

                酶標(biāo)儀的波長450nm

                 

                 

                抗體的稀釋錯(cuò)誤

                正確的稀釋抗體

                 

                 

                水質(zhì)問題

                礦泉水代替

                 

                 
                白   板
                 
                 

                洗滌液配制錯(cuò)誤

                正確的配制洗滌液

                 

                 

                少加液體(抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液)

                正確的步驟加液體

                 

                 

                錯(cuò)加液體

                 

                 

                 
                無 梯 度
                 
                 

                標(biāo)準(zhǔn)品也污染

                換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板

                 

                 

                OD值不正常

                控制溫度時(shí)間在做一次

                 

                 

                人為點(diǎn)板

                /

                 

                線 性 不 好
                 

                OD值不正常

                控制溫度時(shí)間在做一次

                 

                 

                人為點(diǎn)板

                /

                回  收  率
                 
                 
                 
                 
                 
                 

                 
                空白管陽性高
                 
                 

                樣本本身就是陽性樣本

                換陰性樣本做回收率

                 

                 

                空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染

                實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染

                 

                 

                水質(zhì)原因

                用娃哈哈礦泉水代替

                 

                 
                 
                偏  高
                 
                 
                 
                 

                添加量不準(zhǔn)確

                的添加量

                 

                 

                添加濃度不適合

                添加合適的濃度

                 

                 

                取液吹干量多

                準(zhǔn)確的取液吹干

                 

                 

                取到其它相層液體

                取需用相吹干

                 

                 

                復(fù)溶液未稀釋或加入量少

                正確的稀釋復(fù)溶液

                 

                 
                偏  低
                 
                 
                 

                添加量不準(zhǔn)確

                的添加量

                 

                 

                添加濃度不適合

                添加合適的濃度

                 

                 

                取液吹干量少

                準(zhǔn)確的取液吹干

                 

                 

                復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多

                正確的稀釋復(fù)溶液

                 
                 
                假陰、陽性
                 
                 
                 
                 
                 

                水質(zhì)原因

                點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證

                用娃哈哈礦泉水代替

                 

                實(shí)驗(yàn)操作原因
                 
                 
                 

                吸取到其它相吹干

                準(zhǔn)確的取液吹干

                 

                 

                離心不*

                延長離心時(shí)間

                 

                 

                樣本的污染

                更換樣本

                 

                 

                乳化未處理*

                溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象

                 

                儀器試劑原因
                 

                離心管未清洗干凈

                正確的洗滌器具

                 

                 

                有機(jī)溶劑的影響

                做試劑空白看影響結(jié)果

                 

                衍生化試劑原因(長時(shí)間衍生化試劑變質(zhì))

                更換衍生化試劑

                 

                與曲線好壞相關(guān)

                保證曲線的正常

                 
                 
                金標(biāo)檢測(T)線顏色較淺
                 
                 

                尿液pH偏堿性

                用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。

                 

                尿樣滴加過多

                重新測定,尿樣按照說明書,控制在2滴

                 

                尿液過于混濁

                將尿液離心后,取上清液重新測定

                 
                 
                金標(biāo)質(zhì)控(C)線不出現(xiàn)
                 
                 
                 
                 
                 
                 

                檢測卡由于高溫、受潮等原因失效

                尿樣需要重新檢測。

                 

                過了有效期失效。

                該批號(hào)的金標(biāo)應(yīng)丟棄處理,尿液需要重新檢測
                 

                 

                操作過程中檢測卡沒有平放,導(dǎo)致液體樣品直接沖過檢測區(qū)

                尿樣需要重新檢測,且檢測卡平放于桌面上再加樣。

                 

                尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)(比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等)

                該尿液的檢測結(jié)果無效

                金標(biāo)卡上在除了T和C線之外的其他地方出線

                金標(biāo)卡上的劃痕;膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而在卡上的痕跡;

                該檢測卡結(jié)果不可信,尿液需要重新檢測。

                實(shí)驗(yàn)重復(fù)性不好

                操作人員的不一致,取樣的不一致,樣本數(shù)量的多少,加樣時(shí)間的長短,洗滌條件不一致,加樣量不一致

                盡量保持的實(shí)驗(yàn)一致性
                 

                分析軟件的使用
                 

                不能設(shè)置和保存

                正確的設(shè)置和保存

                 

                如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果

                正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果

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